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中药显微鉴别技术_取样、制片、染色

中药的显微鉴定法是利用显微技术对中药进行显微分析，以确定其品种和质量的一种鉴定方法。显微鉴定主要包括组织鉴定和粉末鉴定，利用显微镜来观察药材的组织构造、细胞形状及内含物的特征、矿物的光学特性，和用显微化学方法，确定细胞壁及细胞内含物的性质或某些品种有效成分在组织中的分布等，用以鉴别药材的真伪与纯度甚至品质。

一、取样

取样的代表性直接影响到结果的判断准确，因此必须重视取样的各个环节。

（一）对照品

对照品粉末是检定供试品的参照物，其制备是显微鉴别的先决条件。有经验者，可自取标本，鉴定后制作，或购买药材经品种基原鉴定。还应注意有些药材的显微特征受生长年限及环境的影响，会产生一定的波动，所以对于供试品的产地、采收期、加工方法等也应当认真记录。

（二）供试品

中药材  原药材应注意基原、产地、规格的完整性、清洁程度以及有无水迹、霉变或其他物质污染等情况，并详细记录。

（1）从同批药材包件中抽取有代表性的检定用样品。

（2）对破碎的、粉末状的或大小在 1cm 以下的药材，一般药材 100g-500g；粉末状药材25g；贵重药材5g-10g；个体大的药材，根据实际情况抽取代表性的样品。

（3）将所取有代表性样品混合均匀，即为总样品量。

（4）前处理：将供试品捡净后，用量较小时，可以用乳体或小型电磨粉碎过《中国药典》6号筛（1.0μm-250μm）备用。

1、中成药

（1）取样：从各批号的箱、包、瓶中随机取样，记录好厂家、批号，从各包装盒中任意取1丸，每批号不得少于3次。各供试品留样保存，保存期限至少1年。

水丸无包衣时，可直接取2 丸-3 丸，乳钵中研成细粉后，取少量置裁玻片上，滴加规定的试液，搅拌均匀，使粘结的细胞、组织分离，再按粉末特征加水合氯醛试液或其他适当试液处理后观察。

水蜜丸或大蜜丸；可直接用刀片横向切开取一薄片，或用小钢铲取一小块（约15mg）放置在载玻片上制片观察。

（1）去包衣：中药片剂常见包衣为糖衣，隔离层常使用胶浆、糖浆和滑石粉。水丸和糊丸等（挂）衣的材料有滑石、蔗糖、朱砂、雄黄、青黛、百草霜、礞石、赫石等。可用刀片将包衣剥去，简单的办法也可将片剂或丸剂断为两半，直接取内心，粉碎进行观察。

（2）添加剂：为便于观察，可对中成药的制造过程中使用的添加剂做适当的前处理。

除去水溶性干扰物：将检品置于蒸馏水中研匀，离心处理，取沉淀物检查。

除去脂溶性干扰物：将检品滴加适量氯仿，离心处理，取沉淀挥干氯仿后检查。

除去淀粉，糊化淀粉的干扰：将检品滴加蒸馏水研匀，置烧杯中煮沸、冷却，离心处理，取沉淀检查。

以上操作中，为防止某些显微特征的流失，应进行留样观察。

二、制片

（一）制片

1、载玻片与盖玻片  载玻片与盖玻片是影响图像质量的因素之一。因载物台下的聚光器是按使用一定厚度的载玻片设计的。首先应选择规格统一的载玻片（厚0.9mm-1.2mm）与盖玻片（厚0.12mm-0.17mm）。使用前，将载玻片与盖玻片用无水乙醇浸泡后，用柔软的绸布或无纤维人造纸揩擦，至表面洁净无暇。

2、制片  将供显微观察的粉末药材或样品置于载玻片上，然后加入适宜的试液1滴，用玻璃棒搅匀，用镊子将盖玻片沿一侧轻轻放下，使液体自然展匀即可。可用滤纸吸拭溢出的液体或从盖玻片边缘补充液体不足的空隙。

（二）制片按使用试剂分类

1、稀碘液制片  主要用于观察含淀粉粒。

2、斯氏试液制片  试液由醋酸：甘油：水（1：1：1）组成。用于观察包括淀粉粒在内的所有显微鉴别特征。

3、水合氯醛制片  水合氯醛试液能渗透组织，使皱缩的细胞膨胀并能溶解淀粉粒、蛋白质、树脂、挥发油和叶绿素等，使细胞组织变得透明而清晰。

4、乙醇装片  在观察的切片中有菊糖、粘液、树胶等时，使用95%以上的乙醇。

（三）制片按保存时间分类

1、临时制片  封藏介质一般为流动性液体，不耐久藏。但制作简易、适用于一般的显微观察及显微化学反应。

2、半永久性制片  在上述临时制片周围，直接使用加拿大树胶，将盖玻片周围封严，室温放置 1 天干燥后，置冰箱内，一般可供 10 年以上观察使用。封藏介质还可以选用半固体的甘油明胶。

3、永久性制片  封藏介质一般呈固态，可长期保存，但制作费时，多用于教学标本。制作方法一般是先将粉末用无水乙醇浸润，随后沥去乙醇，用二甲苯浸润，再沥去二甲苯，滴加加拿大树胶的二甲苯溶液后，自然挥发干燥固定后即可。

三、染色

为使标本片特征显著，可根据细胞壁及细胞内含物的性质，加入不同染色剂染色。常见的显微化学反应如下（所有试液的配制方法参见《中国药典》）。

（一）细胞壁性质的检定

1、木化细胞壁，加间苯三酚试液1 滴-2 滴，稍放置，加盐酸 1 滴，因木化程序不同，显粉色、红色或紫红色。此操作最好在水合氯醛透化后再进行，其效果较好。

2、木栓化或角质化细胞壁，加苏丹iii 试液，稍放置或微热，呈橘红色至红色。

3、纤维素细胞壁  加氯化锌碘试液，或先加碘试液湿润后，稍放置，再加硫酸溶液（33-50）显蓝色或紫色。

（二）细胞内含物性质的检定

1、淀粉粒  加稀碘试液，呈蓝色或紫色。

2、糊粉粒  （1）加碘试液，呈黄棕色。（2）加硝酸汞试液，呈砖红色（材

料中如含有多量脂肪油，宜先用乙醚或石油醚脱脂后进行）。

3、脂肪油、挥发油和树脂（1）加苏丹 iii 试液，呈橘红色，红色或紫红色。（2）加90%乙醇、脂肪油和树脂不溶解（蓖麻油及巴豆油例外），挥发油则溶解。

4、菊糖  加10%α-萘酚乙醇溶液，再加80%硫酸1滴-2滴，显紫红色并很快溶解。

5、粘液  加钌红试液，呈红色。

6、草酸钙结晶  （1）加稀醋酸不溶解，加稀盐酸即溶解但无气泡发生。（2）加硫酸（1-2）逐渐溶解。片刻后析出针状硫酸钙结晶。

7、碳酸钙（钟乳体），加稀盐酸溶解，同时有气泡发生。

8、硅质  加硫酸不溶解。

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